Балким, сиз илимий проекттин протеинин денатурация кылгыңыз келет, же денатурацияланган тамак жөнүндө окуп, анын кантип иштээрин билгиңиз келет. Денатурация - бул тышкы күчтөрдүн, анын ичинде жылуулуктун, радиациянын, кислоталардын жана эриткичтердин таасири менен протеин формасын жана түзүлүшүн жоготуу процесси. Органикалык эриткичтер көбүнчө белокторду денатурациялайт. Белокту денатурациялоонун так жолу, сиз иштегиси келген конкреттүү бир нерсеге көз каранды, анткени алардын баары денатурациянын ар кандай деңгээлдерин талап кылат. Кандайдыр бир белоктун көпчүлүгү денатурацияланышы мүмкүн, бирок эгерде сиз белоктун чөйрөсүндө эмнени өзгөртүү керектигин билсеңиз.
Кадамдар
Метод 1 2: протеин денатурациялоо
Кадам 1. Жылуулукту колдонуңуз
Жылуулук - бул белокту денатурациялоонун эң оңой жана кеңири таралган жолдорунун бири. Бул протеин тамак -ашта болгондо, тамакты жөн эле бышыруу белоктордун денатуратына алып келет. Көптөгөн протеиндерди 100 ° C (212 ° F) же андан жогору температурага чыгаруу аркылуу денатурациялоого болот. Бул белоктордун уюп кетишине жана алардын ээрүү жөндөмдүүлүгүнүн төмөндөшүнө шарт түзөт.
Экспозиция узактыгы сиз жылыткан нерсеге көз каранды. Мисалы, жумуртка көмөч казанда беш мүнөттө бышып кетиши мүмкүн, ал эми куурулганды мешке бышыруу үчүн бир нече саат кетиши мүмкүн
2 -кадам. Спирт колдонуу
Спирт пептиддик байланыштын амид топторунун ортосунда пайда болгон суутек байланыштарын бузат. Белок спирт эритмесине дуушар болгондо, спирт молекулалары белок чынжыры менен жаңы байланыштарды түзөт. 70% спирттин эритмесин колдонуп, бактериялардын клетка дубалын бузуп, протеинди денатурат.
Концентрацияланган спирттер коркунучтуу болушу мүмкүн, анткени алар күйүүчү жана уулуу. Ар дайым кол кап жана көз коргоочу каражаттарды кошо кийиңиз жана температураны көзөмөлдөгөн коопсуз чөйрөдө кармаңыз
3 -кадам. PH өзгөртүү
Протеиндин ички түзүлүшү анын чөйрөсү өтө кислоталуу же өтө щелочтуу болгондо бузулушу мүмкүн, анткени алар белоктун туз көпүрөлөрүн бириктирген иондук байланыштарды бузушат. Белокко кислота же базалык эритме кошуңуз. Денатурацияны колдоо үчүн айланадагы чөйрө рН 10дон жогору же 4төн төмөн болушу керек. Эгер кислота менен өзгөрүүнү козгоп жатсаңыз, рН 2ден 5ке чейин болушу керек.
РНны өзгөртүү аминокислотанын ар бир функционалдык тобунун pKa жараша бир аминокислотаны иондоштурушу мүмкүн. Сиз ошондой эле аминокислотада бар амин тобун же карбоксил тобун иондоштурсаңыз болот
Кадам 4. Оор металлдардын туздарын колдонуп көрүңүз
Оор металлдар протеиндеги байланыштарды бузуп, структурасын жоготуп коюшу мүмкүн. Сымап жана коргошун сыяктуу оор металлдардын туздары түрдүү белокторду денатурациялоо үчүн колдонулушу мүмкүн. Мындай туздар көпчүлүк химиялык жеткирүүчүлөрдөн алынат жана ар дайым этияттык менен жана тийиштүү коопсуздук жабдуулары, анын ичинде мээлей жана көздү коргоочу каражаттар менен колдонулушу керек.
Оор металлдар комплекстерди түзүү үчүн белоктун функционалдык каптал чынжыр топтору менен өз ара аракеттене алышат. Оор металлдар белоктун аминокислота каптал чынжырларын да кычкылдандырат
2дин 2 -методу: Протеиндердин ренатурациясы
Кадам 1. Белоктун кайра бүктөлө аларын аныктаңыз
Денатурациянын кээ бир түрлөрү туруктуу, башкаларын жокко чыгарса болот. Мисалы, жумуртка же эт бышырууну артка кайтаруу мүмкүн эмес, бирок жогорку рНге дуушар болгон протеин нейтралдуу чөйрөгө салынганда калыпка келиши мүмкүн.
Белоктун кайра бүктөлө алабы же жокпу, анын ДНКсына жараша болот. ДНК протеиндин түпкү абалына кайтышы үчүн керектүү маалыматты камтыйт
Кадам 2. Денатурациялоочу факторду алып салыңыз
Белоктун айланасындагы чөйрөнү стазга кайтарып, денатурациялоочу элементти алып салыңыз. Мисалы, кислотаны же негизди алып салыңыз же белокту дагы акылга сыярлык температурага алып келиңиз.
Кадам 3. Ренатурация комплектин колдонуңуз
Көптөгөн лабораториялык жабдуулар компаниялары ренатурацияны стимулдаштыруу үчүн эң жакшы параметрлерди текшерүүгө мүмкүнчүлүк берген ренатурация топтомун сатышат. Эгер лаборатория же эксперименталдык шартта белокторду карап жатсаңыз, мындай комплекттер өзгөчө пайдалуу болушу мүмкүн.
Кеңештер
- Денатурацияланган протеин өзүнүн түпкү абалында көрүнгөн кварталдык, үчүнчү жана экинчи структурасын жоготот, бирок анын негизги структурасы кала берет.
- Денатурацияланган протеин да кээ бир учурларда, ферменттер сыяктуу, биоактивдүүлүгүн жоготот, иштөө жөндөмдүүлүгүн жоготот. Мисалы, субстрат денатурацияланган ферменттерге байланыша албай калышы мүмкүн.
- Денатурацияланган протеин эритмесинде эригичтигин жоготушу мүмкүн.
- Сиз ошондой эле жиптерди ажыратуу үчүн лабораториялык ыкмаларды колдонуп нуклеин кислоталарын денатурациялай аласыз.
